
結合此前討論的豬葡萄球菌PCR陽性對照相關背景,正確配制需嚴格遵循以下步驟:
?前期準備?
在獨立的專用區域操作,使用無DNA酶的高壓滅菌離心管、帶濾芯槍頭,提前準備好試劑盒配套的熒光PCR專用模板稀釋液。
?梯度稀釋操作?
標記6個離心管,各加入45μL稀釋液,取5μL濃度為1×10E8拷貝/μL的原始陽性對照加入首管,震蕩1分鐘得到1×10E7拷貝/μL的工作液,換槍頭依次完成后續10倍梯度稀釋,得到6個梯度的陽性對照,全程放冰上待用。
?實驗用工作對照配制?
取10μL上述1000倍稀釋后的陽性對照,加入對應體積的無酶水,配制成和待測樣本起始體積一致的樣品制備陽性對照,即可投入實驗使用。
?關鍵注意事項?
所有操作全程避免污染樣本和試劑盒其他組分,剩余未用完的稀釋后對照需分裝后-20℃保存,避免反復凍融。
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